Laboratorio

Hematología especializada

Servicios

  • Interpretación de mielogramas
  • Interpretación de biopsias de médula ósea
  • Citometría de flujo para la clasificación inmunológica de leucemias, linfomas, síndromes mielodisplásicos
  • Cuantificación de células madre para pacientes trasplantados
  • Niveles de CD3/CD4/CD8/CD45 para pacientes con inmunodeficiencias

¿Qué es la citometría de flujo?

Descomponiendo la palabra la citometría de flujo es: Cito: célula, metría: medida, es decir una prueba que permite evaluar y medir una serie de características particulares de una célula.

Pruebas que se realizan en el Hospital Pablo Tobón Uribe

  • Prueba tamiz para enfermedad aguda y definición del linaje de leucemia linfoide aguda B o T, leucemia mieloide aguda
  • Prueba tamiz para síndromes linfoproliferativos crónicos y definición de la enfermedad
  • Definición de enfermedad crónica, síndromes mielodisplásico
  • Clasificación de las discrasias de células plasmáticas
  • Otras enfermedades hematológicas
  • Niveles de CD3, CD4 y CD8 para pacientes inmunodeficientes y con SIDA - VIH, siguiendo las recomendaciones del Centro para el Control y Prevención de Enfermedades de Estados Unidos (CDC).
  • Cuantificación de células tallo (células stem-CD34) para pacientes que van a ser trasplantados. 

Significado clínico

La citometría de flujo es útil para el diagnóstico y seguimiento de los pacientes en entidades hematológicas. Además de:

  • Observar las curvas de maduración de granulocitos, monocitos y eritrocitos
  • Evaluar alteraciones o patrones anormales de enfermedades como leucemia aguda y síndrome mielodisplásico.
  • Permite definir enfermedades raras como:
    • Neoplasia de mastocitos
    • Neoplasia de basófilos
    • Neoplasia de células dendríticas plasmocitoides
  • Permite predecir alteraciones citogenéticas recurrentes como:
    • 11q23 (NG2)
    • 15:17 (ausencia del CD15) y curva de maduración
    • Inversión del cromosoma 16
    • Translocación 9:22 en leucemia linfoblástica aguda
    • Translocación 11q23 en leucemia linfoblástica aguda
    • Translocación 8:21
  • Permite la búsqueda de enfermedad mínima residual de manera reproducible por el uso de iguales anticuerpos (mismos clones)
  • Permite identificar anticuerpos específicos para enfermedad:
    • Leucemia linfoide crónica/linfoma del manto: CD200
    • Tricoleucemia: Lair 1/CD11c
  • Además es una técnica completamente reproducible y respaldada por la literatura

Recuento de CD34/CD45

Las células madre hematopoyéticas están presentes en la médula ósea, sangre periférica movilizada (aféresis) y cordón umbilical. Para su enumeración se utilizan anticuerpos anti CD34 clase III.

En el laboratorio del Hospital Pablo Tobón Uribe se cuenta con el citómetro de flujo FACSCanto II (Becton Dickinson) que es un equipo análogo automatizado que utiliza una aplicación rápida, cuantitativa y reproducible para evaluar la población CD34+. Se trabaja con la plataforma ISHAGE, se usa un reactivo que contiene una combinación de anti CD45 y CD34 y tubos tru-count que permite hacer el cálculo absoluto en una sola plataforma. Se adquieren 100.000 eventos CD45 o un mínimo de 100 eventos CD34 positivos como lo sugieren las guías internacionales (Nota: como se recomienda en las guías ISHAGE y los Grupos de Trabajo Europeos en Análisis Clínico Celular.

Los tipos de muestra en los que se realiza el recuento son sangre periférica normal o movilizada, leucoféresis, cordón umbilical o médula ósea. Adicionalmente se realiza viabilidad de la prueba a todas las muestras de aféresis con 7AAD. Los valores aceptables para la viabilidad de esta prueba están bajo criterio médico.

A las aféresis realizadas se les reporta el valor total de CD34+ por microlitro y por kilogramo de peso, el número de aféresis para cada paciente lo determina el médico de acuerdo a la necesidad y al tipo de enfermedad.

Se inicia el proceso con un recuento celular en el equipo de hematología LH780 de (Beckman Coulter) para conocer el número total de leucocitos. Si este resultado es por encima de 40.000 leucocitos/mm3 se debe realizar una dilución de acuerdo a este número para garantizar que el anticuerpo no se agote.

Para el cálculo del resultado final se incluye la dilución, el volumen de la aféresis y el peso del receptor y se reporta en número absoluto, % y viabilidad celular.

Control de calidad

  • Se realiza control del equipo con perlas calibradoras
  • Se realiza control de estandarización de los laser
  • Se realiza optimización del equipo
  • Se procesa dos niveles de control comercial con valor conocido de CD34+, uno bajo y otro alto
  • Se procesan dos niveles de control comercial con valor conocido de CD3/CD4/CD8/CD45, uno bajo y el otro normal
  • Se realiza control de calidad externo con el Colegio Americano de Patología

 

¿Cuál es el horario?

Se procesan muestras de lunes a viernes. El horario de recepción de muestras es de lunes a jueves las 24 horas y el viernes hasta la una de la tarde.

La oportunidad de las pruebas

Para la citometría de flujo de un paciente con una enfermedad aguda, el reporte se hace el mismo día al médico tratante.

El reporte del resultado se realiza en conjunto, luego de revisar el hemograma, el mielograma, la biopsia, la citometría de flujo y las coloraciones especiales de inmunohistoquímica, en el caso que se necesite, el promedio de reporte del caso es de cinco días.

Quienes integran el equipo?

El equipo de trabajo lo conforma una hemato-patóloga, la Dra. Carolina Echeverri; un patólogo entrenado en hematología, el Dr. Ricardo Cardona y cuatro bacteriólogos entrenados en morfología y citometría: Angelica Llano, Lina Arcila, Wilber Quintero y Gladys Mejía.

Laboratorio de biología molecular

El laboratorio Clínico y de Patología del Hospital Pablo Tobón Uribe pone a disposición de la comunidad el servicio de Biología Molecular para:

  • Detectar mutaciones en el genoma que producen cáncer y enfermedades hematológicas
  • Detectar la presencia de células malignas residuales
  • Detectar microorganismos presentes en sangre, fluidos corporales, tejidos y biopsia


Enfermedades hematológicas

Factor V Leiden

Genotipificación para detectar la mutación del factor V de Leiden (R506Q o 1691 G:A) por PCR en tiempo real. Esta mutación es el factor de riesgo genético más frecuente para la trombosis venosa está presente en el 5% de la población general. Es una forma cambiada o "mutada" del factor V que se inactiva diez veces más lentamente que el factor V normal. Esto provoca que permanezca más tiempo en la circulación, produciendo un estado de hipercoagulación. Tener una copia del gen del factor V Leiden aumenta el riesgo de trombosis venosa de 4 a 8 veces, mientras que dos copias del gen aumentan el riesgo 80 veces.

Otros defectos de la coagulación pueden coexistir con el factor V de Leiden aumentando el riesgo de trombosis en los pacientes que los portan.

La mutación del factor V de Leiden está implicada en el 20-40% de los casos de trombosis venosa, y se sospecha en individuos que tienen antecedentes médicos de trombosis venosa o en familias en las que existe una alta incidencia de trombosis venosa.

Tipos de muestra: Sangre periférica: 5 ml con EDTA. Los materiales de extracción y tubos con EDTA (tapa morada) deben estar estrictamente estériles. Las muestras deben conservarse a 4°C por un tiempo no mayor de 24 horas. El laboratorio puede suministrarle los tubos.

Protrombina

Genotipificación para detectar la mutación 20210 G:A del gen de la protrombina por PCR en tiempo real. Se halla localizado en el gen de la Protrombina, Factor XIII de la subunidad a una mutación (20210G->A) que se asocia a niveles altos de protrombina en plasma, así como del complejo trombina-antitrombina (TAT) y del fragmento 1+2 de la protrombina. Estudios recientes han demostrado que estos niveles altos no sólo se encuentran en pacientes homocigotos para la mutación sino que se hallan también, pero en menor medida, en individuos heterocigotos, siendo bajos en personas homocigotas normales.

El estudio de la mutación 20210G->A es importante no sólo en pacientes con historia de trombosis sino también en personas asintomáticas ya que se ha evidenciado que está directamente relacionada con el aumento del riesgo de trombosis tanto arterial como venosa.

El análisis de la mutación 20210G->A se realiza mediante amplificación por PCR. Este método presenta una alta precisión y sensibilidad en la detección de individuos afectados, portadores de la mutación y sanos. La identificación de portadores permitirá tomar medidas de prevención en aquellos individuos que presenten la mutación cuando estén sometidos a situaciones de riesgo (embarazo, tratamiento con anticonceptivos, inmovilizaciones prolongadas, etc.) y como factor de riesgo de infarto de miocardio.

 Tipos de muestra

Sangre periférica: 5ml con EDTA. Los materiales de extracción y tubos con EDTA (tapa morada) deben estar estrictamente estériles. Las muestras deben conservarse a 4°C por un tiempo no mayor de 24 horas. El laboratorio puede suministrarle los tubos.



La gráfica muestra en azul el control negativo, en verde, el paciente a evaluar y en rojo el control positivo que muestra dos picos: el primero es la mutación y el segundo pico corresponde al genotipo normal.

 

Enfermedades infecciosas

Parvovirus B19

Detección cualitativa del antígeno de Parvovirus B19 por PCR en tiempo real. El Parvovirus B19 infecta sólo a los seres humanos. Los perros y gatos domésticos se pueden infectar por parvovirus animales. Este virus se encuentra en las secreciones respiratorias (por ejemplo, la saliva, el esputo y el moco nasal), el virus se propaga de una persona a otra por contacto directo con dichas secreciones.

El espectro de cuadros clínicos en los que se implica al parvovirus B19 se ha ampliado, e incluye: generación de abortos o hidropesía fetal no inmune, artritis, anemia crónica en inmunodeprimidos, eritroblastopenia transitoria de la infancia, púrpura vascular, púrpura trombocitopénica, hemofagocitosis, encefalitis, miocarditis, costocondritis, linfadenitis mesentérica, gastroenteritis aguda, pseudoapendicitis, vasculitis aguda, poliarteritis nodosa, queratolisis exfoliativa, bronquitis, bronquiolitis, laringitis, síndrome respiratorio y otros.

El parvovirus B19 se ha identificado como causa de miocarditis y pericarditis en niños y adultos, siendo incluso causante del rechazo de un trasplante cardíaco; también se ha implicado en algún caso de hepatitis y de síndrome de fatiga crónica.

 Infección durante el embarazo

La infección por este virus se asocia con la pérdida fetal en la embarazada, aún en ausencia de síntomas maternos. La necesidad de una mayor producción de hematíes y la incapacidad del sistema inmune fetal para controlar la infección ocasiona una eritroblastosis fetal con el consiguiente aborto o hidropesía fetal no inmune. Cuadro considerado actualmente como la principal manifestación de la infección por Parvovirus B19 en la embarazada. Por lo general, la infección durante el embarazo conduce al nacimiento de un niño sano. Respecto al papel teratógeno del virus, se han descrito asociaciones con hidrocefalia, infarto de miocardio, malformaciones del ojo, calcificaciones esplénicas entre otros.

Infección en los pacientes con el síndrome de inmunodeficiencia adquirida o congénita en pacientes con infección por VIH, leucemias, trasplantados y enfermedades malignas que puede producir una infección persistente por Parvovirus B19 con supresión de la médula ósea, manifestándose como una anemia crónica con o sin neutropenia o trombocitopenia. Cabe destacar que en estos enfermos generalmente no se evidencia exantema ni artralgia. Personas con cáncer, leucemia, con inmunodeficiencias hereditarias o adquiridas y transplantados, tiene un alto riesgo de sufrir una enfermedad grave por la infección con parvovirus B19.

Diagnóstico

El diagnóstico de la infección por parvovirus B19 resuelve gran número de exantemas atípicos, síndromes mononucleósicos y artropatías, hasta ahora de etiología desconocida. Dada la dificultad para cultivar el virus su diagnóstico se basa en la detección directa de antígenos o DNA y en las pruebas serológicas. En aquellos casos clínicos en los que el estudio serológico no ayude al diagnóstico, existe la posibilidad de hacer un diagnóstico directo mediante la demostración del virus. La técnica más sensible para detectar DNA de parvovirus B19 es la PCR esta técnica proporciona un diagnóstico cuantitativo rápido y sensible para el estudio de las muestras.

Tipos de muestra: Sangre periférica: 5ml con EDTA o médula ósea en tubo estéril, líquido sinovial, líquido amniótico. Los materiales de extracción y tubos con EDTA (tapa morada) deben estar estrictamente estériles. Las muestras deben conservarse a 4oC por un tiempo no mayor de 24 horas. El laboratorio puede suministrarle los tubos y materiales para la punción.

Epstein Barr EBV

Detección cuantitativa del virus de Epstein Barr virus (EBV) por PCR en tiempo real. Es un miembro de la familia de los herpesvirus. El 95% de los individuos adultos entre 35-40 años han sido infectados. Un evento tardío de éste virus es el linfoma de Burkitt y el carcinoma nasofaríngeo donde el EBV juega un papel importante en estas malignidades. Además produce la mononucleosis infecciosa, también llamada la "enfermedad del beso", linfoadenopatías y se relaciona con la aparición de otros linfomas.

El uso de las técnicas de Biología Molecular por PCR para detectar el DNA viral es muy específico y sensible. La detección del EBV es importante para el diagnóstico y monitoreo de pacientes con ciertas neoplasias, así como también para los receptores de transplantes, pacientes infectados con el virus de HIV con linfoma y pacientes con carcinoma nasofaríngeo.

Tipo de muestra: Sangre periférica: 5ml con EDTA. Los materiales de extracción y tubos con EDTA (tapa morada) deben estar estrictamente estériles

LCR: mínimo 2 ml, los materiales de extracción y tubos deben estar estrictamente estériles. Las muestras deben conservarse a 4°C por un tiempo no mayor de 24 horas. El laboratorio puede suministrarle los tubos y materiales para la punción. 

Toxoplasma gondii

Detección cuantitaiva de Toxoplasma gondii. El potencial diagnóstico para Toxoplasma incluye adultos inmunocompetentes, pacientes inmunosuprimidos, pacientes trasplantados, enfermedad ocular y embarazadas, puesto que la sola determinación de IgG e IgM suelen plantear un problema importante y de difícil interpretación, ubicando la detección del parásito por PCR en un lugar privilegiado ya que es confiable y oportuno permitiendo la instauración rápida del tratamiento y disminución del riesgo de transmisión vertical.

La infección aguda en el paciente inmunocompetente es, generalmente, asintomática. En ocasiones, puede presentarse como un cuadro febril con mialgias y adenopatías, que cursa con linfocitosis. Los síntomas acostumbran a remitir en varias semanas y como máximo requieren tratamiento sintomático con analgésicos.

En el paciente inmunosuprimido las manifestaciones clínicas se relacionan con la reactivación de una infección latente, produciendo cuadros graves, especialmente por la afección del sistema nervioso central (SNC). En la mujer gestante la posible transmisión al feto condiciona una actitud diagnóstica y un tratamiento especial.

Tipo de muestra: El análisis se puede realizar en cualquier tipo de fluido (sangre, líquido amniótico, tejidos, lavado broncoalveolar, humor vítreo).Si la muestra es sangre periférica, tomar 5ml con EDTA. Los materiales de extracción y tubos con EDTA (tapa morada o tapa perla) deben estar estrictamente estériles. Las muestras deben conservarse a 4ºC por un tiempo no mayor de 24 horas.

Citomegalovirus CMV

Detección cuantitativa del citomegalovirus CMV por PCR en tiempo real. La infección por Citomegalovirus (CMV) es una de las infecciones oportunistas más comunes después de los trasplantes de órganos y en las etapas finales de la infección por HIV. El examen para la detección de Citomegalovirus por PCR presenta alta especificidad, siendo importante no sólo en el diagnóstico diferencial en las neumonías y enfermedades gastrointestinales, sino también para diagnóstico precoz de los casos de reactivación asintomática del virus ya que este puede ser detectado aún en ausencia de síntomas clínicos.

Tipos de muestra: Sangre periférica: 5ml con EDTA. Los materiales de extracción y tubos con EDTA (tapa morada) deben estar estrictamente estériles. Las muestras deben conservarse a 4°C por un tiempo no mayor de 24 horas. El laboratorio puede suministrarle los tubos.

Herpes virus simplex 1 y 2 (HSV1-HSV2)

Detección cualitativa del Herpes Simplex I - II (HSV) por PCR en tiempo real. Las infecciones del sistema nervioso central por los virus herpes simplex (HSV) tienen una morbilidad significativa y se asocian con una mortalidad elevada. La infección neonatal es la consecuencia más grave de la infección genital clínicamente, puede manifestarse bajo la forma de una localización cutánea, ocular y oral, como una encefalitis o como infección diseminada. La mortalidad de la infección diseminada es superior al 70%.

La detección del virus por métodos moleculares permite el diagnóstico correcto de éstas infecciones, es altamente específico y de gran valor predictivo. Esta técnica es de gran importancia puesto que la instauración precoz de un tratamiento adecuado disminuye de forma significativa la mortalidad.

Tipos de muestra: LCR: mínimo 2 ml. Los materiales de extracción y tubos deben ser nuevos y estar estrictamente estériles. Las muestras deben conservarse a 4°C por un tiempo no mayor de 24 horas. El laboratorio puede suministrarle los tubos y materiales para la punción.

Mycobacterium tuberculosis

Detección cualitativa de M. tuberculosis por PCR. El Mycobacterium tuberculosis es el agente causal de la tuberculosis, constituye una de las causas más importantes de morbilidad y mortalidad. Hay que destacar la alta incidencia de la enfermedad en los países en vías de desarrollo y el impacto que sobre ella está teniendo la coinfección con el virus de la inmunodeficiencia humana. La infección inicial suele ser sintomática, las lesiones por lo general, curan y no dejan alteraciones residuales, excepto calcificación ocasional de los ganglios linfáticos pulmonares o traqueo bronquiales.

Aproximadamente el 95% de las personas infectadas inicialmente entran a esta fase de latencia, a partir de la cual existe el peligro permanente de reactivación. En el 5% de los casos la infección inicial puede evolucionar de manera directa hasta culminar en tuberculosis pulmonar o, por la diseminación linfohematógena del bacilo, causar afección pulmonar, miliar, meníngea o de localización extrapulmonar. El retraso diagnóstico y el deficiente estudio de contactos son las causas más importantes de la eclosión de microepidemias en los países desarrollados.

Los problemas terapéuticos que precisan atención prioritaria son el cumplimiento correcto de las pautas de tratamiento y el aumento de las resistencias de Mycobacterium tuberculosis a los tuberculostáticos de primera línea. La alta sensibilidad y especificidad diagnóstica de las técnicas de amplificación de DNA de micobacterias mediante PCR permite su detección en muestras paucibacilares y en un período de tiempo mucho más corto que los métodos tradicionales. Es útil para el diagnóstico rápido de muestras respiratorias BAAR negativas, en casos difíciles (meningitis tuberculosa, tuberculosis diseminada en pacientes HIV) y evita procedimientos invasivos al paciente.

Tipo de muestra: Mínimo 2 ml de lavado broncoalveolar o aspirado traqueal, líquido cefalorraquídeo, líquido pleural biopsias y esputo. Los materiales de extracción y tubos deben ser nuevos y estar estrictamente estériles. Las muestras deben conservarse a 4°C por un tiempo no mayor de 24 horas. El laboratorio puede suministrarle los tubos y materiales para la punción.


Pruebas moleculares en oncología

 Translocación 9;22

Detección cuantitativa de la translocación 9;22 t(9;22): (bcr/abl) por PCR en tiempo real. El cromosoma filadelfia (Ph) es un cromosoma híbrido producido por una translocación entre el gen bcr del cromosoma 22 y el gen abl del cromosoma 9, conocido como la translocación t(9;22). Más del 95% de la leucemias mieloides crónicas (LMC) presentan la t(9;22), además está presente en otros desordenes oncohematológicos como la leucemia linfoide aguda (LLA) (25% casos en adultos y 5% de los casos pediátricos) y la leucemia mieloide aguda en el 1% de los casos.

La detección de estos intercambios de material cromosómico puede realizarse por los métodos de cariotipaje tradicionales, sin embargo existe un 5% de los casos de LMC en los cuales estos intercambios permanecen ocultos; además existen células como los metamielocitos y los neutrófilos que son resistentes a la división celular y en consecuencia al cariotipaje.

En estos casos la biología molecular es la herramienta de diagnóstico utilizada para la detección de esta translocación. La RT- PCR es el método más utilizado debido a su alta sensibilidad, especificidad y rapidez. La sensibilidad de este método es mayor de 99,9% pudiendo detectar una célula positiva bcr/abl en 1.000 o más células normales negativas.

Utilidades clínicas de la detección del cromosoma Ph

  • En pacientes con LMC que han sido trasplantados está recomendado el monitoreo de la t(9;22), las recaídas post trasplantes están relacionadas con la presencia del cromosoma Ph.
  • En la LLA que tienen la t(9;22) el pronóstico es grave e implica la necesidad de utilizar una terapia más agresiva, como el trasplante de medula ósea.

Tipos de muestras necesarias:

  1. Medula ósea: 1-2 ml con EDTA
  2. Sangre periférica: 5ml con EDTA

Los materiales de extracción y tubos con EDTA (tapa morada) deben estar estrictamente estériles. Las muestras deben conservarse a 4°C por un tiempo no mayor de 24 horas. El laboratorio puede suministrarle los tubos y materiales para la punción.

Laboratorio de patología y citología

  • Citología cervico-uterina
  • Citología de líquidos corporales (líquido cefalorraquídeo, orina, líquido pleural y peritoneal)
  • Lavado y cepillado broncoalveolar y bronquial
  • Citología de vías biliares
  • Citología por aspiración con aguja fina (Bacaf)
  • Coloraciones de rutina:
    • Papanicolaou
    • Hematoxilina y eosina
    • Diff Quick
  • Coloraciones especiales: PAS, PAS diastasa, plata metenamina modificada de riñón, Giemsa, hierro, plata metenamina, retículo, rojo congo, tricrómico, Ziehl Neelsen.
  • Coloraciones de inmunohistoquímica: Proporcionamos técnicas complementarias al estudio histológico con la coloración de rutina. En el laboratorio se procesan en la actualidad un amplio panel de marcadores de inmunohistoquimica y contamos con la automatización de la técnica.
  • Citología de orina: como plus contamos con uropatólogo.
  • Procesamiento y lectura de biopsias y especímenes quirúrgicos de todos los niveles complejidad.
  • Biopsias por congelación
  • Inmunofluorescencia en biopsias de piel y riñón

Requisitos generales 

  1. Recipientes para las muestras

    En caso de utilizar recipientes en el envío, estos deben ser tapa rosca, herméticos, de material no frágil y ser tapados correctamente.

    En caso del envío de muestras en fresco como por ejemplo las biopsias por congelación, biopsia renal y biopsia de piel, las cuales van en un medio de solución salina y/o parte en glutaraldehído, deberán ir contenidas en una nevera para preservar en frío la muestra.

    Frasco de muestras

    Los recipientes deben rotulados individualmente para cada una de las muestras enviadas a estudio. 
  1. Marcación de la muestra

    Los datos que deberán ser consignados en el rótulo del recipiente o del contenedor serán:
  1. Nombre completo del paciente                                                
  2. Documento de identidad del paciente
  3. Tipo de muestra
  4. Fecha de recolección de la muestra
  5. Fecha de nacimiento del paciente (día/mes/año)

La información deberá ser consignada con tinta indeleble y asegurar la etiqueta.

Requisitos mínimos para acceder a los servicios ofertados:    

  • Documento de identidad del paciente
  • Muestra adecuadamente rotulada
  • Carné de la seguridad social (si lo tiene)
  • Orden médica vigente en caso de ser por EPS dirigida al Hospital Pablo Tobón Uribe

Medios de pago:

Efectivo, Tarjeta de crédito Amex, cheque nacional, cheque internacional, consignación nacional, tarjeta crédito Diners, Tarjeta debito Diners, efectivo internacional, giro internacional, tarjeta crédito Mastercard, tarjeta débito Mastercard, tarjeta Visa, tarjeta débito Visa, tarjeta crédito Visa electron.

Horario de atención:
Laboratorio de Patología: lunes a viernes de 7:00 a 19:00 horas
Contactos: 445 91 13 - 445 93 92
Correo electrónico: Esta dirección de correo electrónico está siendo protegida contra los robots de spam. Necesita tener JavaScript habilitado para poder verlo.